• Из-за закрытия китайского заведения, где мы раньше втречались, до того, как найдем, что-то подходящее для постоянных встреч, договариваемся о ближайшей встрече, на каждый первый четверг месяца, здесь: Кто в четверг к китайцам???

Портативный трихинеллоскоп

  • Автор темы Автор темы d-alex001
  • Дата начала Дата начала
ВЕТЕРИНАРНЫЕ ПРАВИЛА

ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ТРИХИНЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

В РЕСПУБЛИКЕ БЕЛАРУСЬ



Область применения



Настоящие Ветеринарные правила распространяются на мясо свинины, продукцию из нее (содержащую мышечную ткань), а также мясопродукцию других животных (всеядных, плотоядных), подлежащую обязательной трихинеллоскопии.


Все лишнее убрал, оставил только интересное

1. Общие положения



1.1. Трихинеллез - опасная болезнь человека и многих видов животных, вызываемая волосовидными нематодами - трихинеллами двух видов Trichinella spiralis (с вариететами T. s. nativa, T. s. nelsoni) и T. pseudospiralis, протекает с аллергическими явлениями остро, хронически или бессимптомно. Биологическое развитие обоих видов трихинелл проходит в организме одного хозяина: половозрелая стадия паразита локализуется в кишечнике, а личиночная - паразитирует в мышечной ткани (T. spiralis в капсульной форме, T. pseudospiralis - бескапсульные).

1.2. Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные, плотоядные (барсуки, волки, лисицы, норки, собаки, кошки и др.), морские млекопитающие (киты, моржи, тюлени), грызуны, насекомоядные и другие животные.

У человека трихинеллез протекает тяжело (с лихорадкой) и часто с серьезными осложнениями (миозит, менингит, аллергические отеки в области головы и др.), иногда со смертельным исходом.

Заражение людей происходит при употреблении в пищу инвазированного личинками трихинелл мяса, в основном от кабана и свинины животных с подворного выращивания.

Особенность в развитии T. pseudospiralis в том, что полный цикл развития может проходить не только у млекопитающих животных и человека, но и у птиц.

Благоприятными условиями для развития личинок трихинелл являются поперечно-полосатые мышцы, где первоначально они интенсивно растут, к 17 - 20 дням становятся инвазионными и обнаруживаются под микроскопом. Личинки T. spiralis приобретают S-образную, а затем спиралеобразную форму. В последующем вокруг них формируется соединительно-тканная капсула, хорошо заметная при микроскопии срезов мышц, через 30 - 35 дней после заражения. Личинки T. pseudospiralis прямые или изогнуты пополам и бескапсульные. В капсуле личинки T. spiralis могут сохранять жизнеспособность несколько лет (у человека 25 и более). У свиней, через 6 - 8 мес. после заражения, начиная с полюсов, в полости капсул откладываются соли кальция и к 1 - 1,5 годам личинки обызвествляются, что затрудняет их обнаружение. Обызвествление (петрификация) не всегда губит личинок. Их расселение в мышцах неравномерно-гнездное. Больше находится в мышцах, богатых сетью кровеносных сосудов: у свиней - это в мышцах ножек диафрагмы, затем - пищевода, языка, межреберных и др.; у грызунов, диких животных (кабана, медведя и др.) - в мышцах языка, пищевода, затем диафрагмы, межреберных и других. Преимущественно их находят у сухожильных концов мышечных волокон. Своевременная диагностика трихинеллеза является основным мероприятием в профилактике инвазии.

1.3. Для послеубойной (посмертной) диагностики трихинеллеза используются два метода исследования: компрессорный (микроскопический) - базовый и метод ферментного переваривания мышц в искусственном желудочном соке (ИЖС).
1.4. Прижизненную диагностику трихинеллеза в неблагополучных по инвазии свиноводческих и звероводческих хозяйствах осуществляют иммунными методами (иммуноферментного анализа - ИФА или реакциями кольцепреципитации).
1.5. Обязательному исследованию на трихинеллез подлежит мясо свиней (каждой туши с 3-недельного возраста), кабанов, медведей, барсуков, других всеядных и плотоядных животных, а также нутрий и морских млекопитающих (используемое для пищевых или кормовых целей).

Мясо и продукты из свинины: каждый кусок шпика, солонины, копченостей, субпродукты, имеющие мышечную ткань (язык, голова, диафрагма, ноги, хвосты и др.), независимо от технологической обработки, при отсутствии ветеринарного подтверждения, что получены от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, также исследуют на трихинеллез.

Шпик, солонину, копчености исследуют только компрессорным методом.


1.6. Диагноз на трихинеллез считается установленным при обнаружении в образцах продукции хотя бы одной личинки капсульных или бескапсульных трихинелл, независимо от жизнеспособности. Мясо диких животных и свинину в сомнительных случаях (когда есть включения, которые нельзя дифференцировать) исследуют компрессорным методом (96 срезов, руководствуясь п. 3.4) или проводят двукратное биохимическое исследование из образцов, составленных из трех и более групп мышц. Масса исследуемой пробы 30 - 50 граммов.

1.7. Срок исследования на трихинеллез 1 день, а в сомнительных случаях до 2 дней. Время микроскопии срезов одного компрессория составляет 2 - 3 минуты, а в сомнительных случаях не менее 3 минут.

2. Отбор проб (и пересылка) материала для исследования

2.1. Для исследования от каждой туши (в т.ч. мороженой) отбирают 2 пробы (около 60 г каждая): от свиней - из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие). При их отсутствии - из мышц реберной части диафрагмы, языка, гортани или пищевода, межреберных или шейных, жевательных, поясничных, икроножных, мышц сгибателей и разгибателей пясти (масса пробы в этих случаях составляется из 3 и более групп мышц). От кабана, медведя, нутрии - мышцы языка, шеи, ножек диафрагмы, жевательные (при обезличке пробы отбирают от каждой полутуши, четвертины). От туш морских млекопитающих - из мышц языка и глаза.

Остатки проб сохраняют до окончательного заключения по исследованию (в сомнительных случаях для контрольного исследования).

3. Микроскопическое исследование

(компрессорная трихинеллоскопия)


Трихинеллоскопия парного, остывшего, охлажденного мяса проводится без обработки срезов.
3.1. Методика исследования. При компрессорной трихинеллоскопии исследуют 24 среза мышечной ткани. В сомнительных случаях исследование проводят согласно п. 1.6.
3.1.1. Подготовка срезов. Из разных мест пробы от каждой ножки диафрагмы изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 12 срезов, величиной с овсяное зерно (толщиной 2 - 3 мм). Срезы помещают в середину клетки нижнего стекла компрессория; покрывают вторым стеклом и, раздавливая срезы, завинчивают винты так, чтобы срезы стали прозрачными, удобными для качественного просмотра (через них можно разобрать мелкий газетный шрифт).
3.1.2. Подготовленные срезы исследуют под малым увеличением микроскопа (8 х 10) или с помощью проекционного трихинеллоскопа (приложение 2) или других приборов. Срезы из свежего мяса в полузатемненном поле зрения микроскопа (трихинеллоскопа) дают четкое изображение.
3.2. Мороженную свинину, мясопродукты из свинины и мясо диких животных исследуют, руководствуясь п. 3.1, но с обработкой срезов, включающей просветление и окраску.

3.2.1. Мороженое мясо исследуют после его размораживания. Срезы нарезают по общей методике. Размещают их на нижнем стекле компрессория, покрывают верхним стеклом, слегка сжимают и раздавливают с таким расчетом, чтобы вытек лишний мясной сок. Затем верхнее стекло снимают и на каждый срез наносят пипеткой по 1 - 2 капли 0,5-процентного раствора метиленового голубого (приготовленного на 50-процентном этиловом спирту) или 1-процентного раствора этакридина лактата, приготовленного на 5-процентном растворе молочной кислоты. Их окрашивают не менее 1 мин. После этого вновь накладывают верхнее стекло и срезы исследуют в обычном порядке.
В срезах, окрашенных раствором метиленового голубого, мышечные волокна окрашиваются в голубой цвет, капсулы трихинелл - лилово-розоватые или синие, личинки не окрашиваются и хорошо видны при трихинеллоскопии.

В срезах, обработанных этакридин лактатом, мышцы просветляются и окрашиваются в светло-желтый цвет, капсулы - в оранжевый и хорошо просматриваются контуры трихинеллы.


3.2.3. Для исследования шпика из проб каждого куска (полученных из прослоек мышечной ткани, или "по линии расслоения") изготавливают 24 среза не толще 1 мм. Их просветляют, при необходимости окрашивают. Срезы со значительным содержанием соединительной ткани помещают в чашку Петри в 5-процентный раствор натрия гидроксида (NaOH) на 5 - 8 мин; затем срезы мышц раздавливают и просветляют 5-процентный молочной кислотой или обрабатывают 1-процентным раствором малахитовой зелени на 5-процентным растворе натрия (калия) гидроксида - 3 - 5 мин. Можно на срезы поочередно нанести по капле 1-процентного метиленового голубого на 1 мин (1 г сини на 100 мл 50-процентного этилового спирта) и добавить по 1 капле 1-процентного раствора калия гидроксида. Затем срезы подогревают 10 - 15 сек (на спиртовке или газовой горелке) до просветления и микроскопируют их в обычном порядке (соединительная ткань окрашивается в голубой цвет, мышечная - в зелено-голубой и хорошо видны трихинеллы).

3.3. При микроскопии срезов (в случаях положительного результата) обнаруживают капсулы с личинками трихинелл (T. spiralis), которые могут быть лимонообразной (чаще от свиней) или округлой формы (от диких животных), внутри капсул располагаются одна или несколько спиралеобразно изогнутых личинок. Докапсульные формы личинок могут быть и не свернувшиеся (прямые, слегка извитые).

Личинки бескапсульного вида трихинелл (T. pseudospiralis) имеют специфическую форму расположения. В мышечных волокнах встречаются, главным образом, прямые личинки, длиной 0,30 мм или согнутые пополам (по форме канцелярской скрепки) при максимальной длине до 0,65 мм. Их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей срезы.


3.5. Время микроскопии 24 срезов (одного компрессория) составляет 2 - 3 мин, а в сомнительных случаях - не менее 3 минут.

Вот второй метод, но он более технологически сложный

4. Трихинеллоскопия после ферментного переваривания

в искусственном желудочном соке



Метод основан на растворении в искусственном желудочном соке (пептолизе) измельченных образцов исследуемых мышц и выявлении при микроскопии личинок трихинелл в осадке.

4.1. Искусственный желудочный сок (ИЖС) готовят по следующей прописи: кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 куб.см; пепсин свиной (активностью 100000 ЕД) для исследования свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, а при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов (колбасных изделий, шпика) пепсина увеличивают до 10 г; вода питьевая (СанПиН 10-124 РБ 98 "Вода питьевая. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем водоснабжения. Контроль качества") с температурой 42 - 43 град. C до 1000 куб.см.

При использовании пепсина медицинского (фармакопейная статья 42-1000-80) его дозу увеличивают до 25 г.

Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 часов с момента изготовления.

4.2. Из отобранной пробы берут навеску массой не менее 10 г (согласно п. 4.5) и измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3 - 4 мм. Затем переносят в коническую колбу соответствующей емкости и заливают ИЖС в соотношении 1:20. Колбу помещают в термостат при 42 - 43 град. C и выдерживают 4 - 5 часов (перемешивая через каждые полчаса). За 15 мин до окончания переваривания прекращают перемешивание. После переваривания на дне колбы остаются темно-коричневые или коричневые хлопья.

4.3. Ускоренное ферментное переваривание мышц проводят, применяя постоянное перемешивание исследуемой смеси магнитными или механическими мешалками, со скоростью перемешивания 250 - 500 оборотов в минуту. При ускоренном переваривании мышц с применением магнитной мешалки навеску мышц, подготовленную по п. 4.2, помещают в стеклянную коническую колбу и наливают в нее искусственный желудочный сок, приготовленный по п. 4.1 (43 - 44 град. C) в соотношении 1:30. В полученный субстрат опускают магнитную палочку и ставят на заранее установленную в термостат и подключенную к электросети магнитную мешалку. Тумблером оборотов постепенно устанавливают скорость вращения магнита около 300 оборотов в минуту. Срок переваривания субстрата в термостате при температуре 43 - 44 град. C при перемешивании магнитом сокращается до 30 - 40 минут. Затем перемешивание перевариваемой смеси прекращают.

После переваривания смесь отстаивают в течение 20 минут.

4.4. Из колбы, после отстаивания переваренного субстрата (в т.ч. с применением магнитных мешалок), осторожно сливают 2/3 надосадочной жидкости, а осадок выливают через капроновое сито (с диаметром ячеек 0,4 мм), установленное в стеклянную воронку с диаметром - до 120 мм и соединенную резиновой трубкой с пробиркой 5 куб.см.

Полученный фильтрат осадка отстаивают 15 мин, затем резиновую трубку перекрывают зажимом, а пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) по частям (3 - 4 части) исследуют на часовом стекле под малым увеличением микроскопа (8 х 10) или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл (при толщине слоя жидкости не более 3 - 4 мм).

Добавлено через 28 минут:
Pomor (Миша) написал(а):
Может я недонёс... варить нужно часа два-три, или тушить, в кипящей воде на плите или ещё каком источнике... а вы что под термообработкой понимаете?
У нас на юге знаю одну семью, которая всем составом, в том числе и дети, не один десяток лет едят кабанятину, медведятину и никогда не проверяют. На мой вопрос о трихенеллезе глава семьи сказал - мы всегда мясо варим три часа, поэтому проверять смысла нет.
Среди охотников бытует мнение что за 2,5-3 часа варки капсула трихенеллы растворяется, соответственно после этого трихинелла погибает. При этом еще одно условие - куски мяса должны быть небольшие (примерно с кулак), чтобы температура свободно проникала. На 100% так это или нет сказать не могу, но многие наши охотники так и делают.
Еще! Такой способ варки недопустим высоко в горах, т.к. из-за более низкого давления температура кипения воды меньше 100 С, соответственно обезараживание кипечением может не помочь.
 
Питохот (Евгений) ,Там 24 микроскопа и столько же лаборантов:ag:
 
У нас на юге знаю одну семью, которая всем составом, в том числе и дети, не один десяток лет едят кабанятину, медведятину и никогда не проверяют. На мой вопрос о трихенеллезе глава семьи сказал - мы всегда мясо варим три часа, поэтому проверять смысла нет.
Среди охотников бытует мнение что за 2,5-3 часа варки капсула трихенеллы растворяется, соответственно после этого трихинелла погибает. При этом еще одно условие - куски мяса должны быть небольшие (примерно с кулак), чтобы температура свободно проникала. На 100% так это или нет сказать не могу, но многие наши охотники так и делают.
Еще! Такой способ варки недопустим высоко в горах, т.к. из-за более низкого давления температура кипения воды меньше 100 С, соответственно обезараживание кипечением может не помочь.

Хорошо что подходят с головой, вариант не 100% но лучше чем ничего. Сам пока без прибора лазил, поступал так же, но перед готовкой замораживал на месяц при т. ниже -18. Знаю лично много охотников которым по барабану, пожарили и всё пох, а в инете таких тысячи и не переубедишь. Здорово что им так везёт, будет ли так всегда?
 
а вот кто без инета и трихинеллоскопа, таких ещё больше...
Это точно, вот и думаю, может по регионам в охотмагазины приборчики раскидать, только сильно дорого будут стоить. Для деревень 5т не поднять, а магазины меньше 70% не делают. На Медведе продают по 6500, еле уговорил их чтоб не дороже, скидку дал хорошую и без предоплаты.
 
Хорошие люди подсказали где приобрести компрессорий, продают по 350р, не дерут по 1,5т.р. как в интернетмагазинах, может кому пригодится очень удобная штука, вот ссылка; http://www.nv-lab.ru/catalog_info.php?ID=234&Full=1
 
Назад
Сверху Снизу